Kit II de RT-qPCR directe
Description du kit :
◮Le kit RT-qPCR direct, utilisant la transcriptase inverse Foreasy et l'ADN polymérase Foreasy HS Taq développée par Foregene, avec un tampon de réaction unique, confère à ce kit une résistance et une compatibilité élevées, et il peut directement tester la réaction en utilisant le système Foregene Lysis comme modèle.Ce kit peut s'appliquer au kit de détection d'acide nucléique COVID-19 et au développement d'autres kits de détection d'acide nucléique de bactéries pathogènes.
Description
Le kit Direct RT-qPCR fournit un tampon RT-qPCR emballé séparément, une ADN polymérase Foreasy HS Taq hautement efficaceet Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV),ce qui le rend pratique pour la création de kits back-end et l'ajustement du système, dans le cadre d'une simple vérification.
Le kit RT-qPCR direct, utilisant la transcriptase inverse Foreasy et l'ADN polymérase Foreasy HS Taq développée par Foregene, avec un tampon de réaction unique, confère à ce kit une résistance et une compatibilité élevées, et il peut directement tester la réaction en utilisant le système Foregene Lysis comme modèle.Ce kit peut s'appliquer au kit de détection d'acide nucléique COVID-19 et au développement d'autres kits de détection d'acide nucléique de bactéries pathogènes.
Ce kit peut directement être le composant du produit IVD, en utilisant facilement et rapidement.Il n'a besoin que d'une vérification facile, sans se développer à nouveau.
Caractéristiques
500T, 50 000T
Composants du kit
| Contenu du kit (système de réaction de 20 μL) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| 500 T | 50 000 t | |
| Foreasy Rtranscriptase inverse (200U/μL) | 50 μL×1 | 1 millilitre×5 |
| Foreasy HS Taq ADN polymérase (5U/μL) | 100 μL×1 | 1 millilitre×10 |
| 2× RT-qPCR directeAmortir | 1 ml × 5 | 500 ml × 1 |
| Instruction | 1 | 1 |
Étapes de fonctionnement
A : Préparation du modèle et du réactif
1. Préparez le modèle d'ARN préparé (il est recommandé d'utiliser le kit de la série Foregene Total RNA Isolation Kit pour extraire et purifier le modèle d'ARN) ou un échantillon de produit de craquage (il est recommandé d'utiliser le système Foregene Lysis), des amorces spécifiques (10 μM) et d'autres consommables pertinents, instrument.
2. Mettez le tampon RT-qPCR direct 2 ×, le ddH2O sans RNase et le colorant de référence ROX 20 × (si nécessaire) dans la boîte avec de la glace, en les faisant fondre naturellement, et mélangez doucement.
B : Préparer le système RT-qPCR
Obtenez la moitié du volume de tampon de réaction du système de réaction (par exemple, si le volume du système est de 20 μL, il doit obtenir 10 μL 2× Direct RT-qPCR Buffer). Pourquantité correspondante d'enzyme, nous suggérons queM-MLV：Système de réaction 10-30 U/20 μL,TaqADN polymérase：Système de réaction 1-2 U/20 μLc'est notre suggestion, vous devriez le tester et l'ajuster), ajouter un modèle d'ARN, des amorces et des sondes spécifiques, et ajouter ddH sans RNase20 à 20 μL.La préparation spécifique du système de réaction RT-qPCR peut être renvoyée au tableau 1 suivant.
Tableau 1 : Préparation du système RT-qPCR
| Composant | Volume | Concentration finale |
| 2 × tampon RT-qPCR direct | 10 μL | 1× |
| Transcriptase inverse Foreasy (MMLV) | 10-30U | |
| Foreasy HS Taq ADN polymérase | 1-2 U | |
| Amorce avant (10 μM) | 0,8 μL | 50-900nM |
| Amorce inverse (10 μM) | 0,8 μL | 50-900nM |
| Sonde (4 μM) | 1 μL | 200nM |
| Modèle (ARN ou lysat) | X μL | |
| 20 × colorant de référence ROX | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6,4-X) μL | |
| Volume total | 20 μL |
Remarque : l'amorce directe et l'amorce inverse sont des amorces spécifiques du gène cible.Le système de la qPCR pourrait être ajusté selon des modèles pratiques expérimentaux et PCR.Nous recommandons 400 nM pour la concentration finale de la plupart des amorces.Ajustez le volume des amorces et des sondes spécifiques en fonction de la concentration préparée et de la concentration finale recommandée, s'il vous plaît.
1* : Sélectionnez la concentration finale appropriée de colorant de référence ROX en fonction des différents instruments de PCR quantitative.La concentration optimale de colorant de référence ROX des instruments PCR quantitatifs courants est indiquée dans le tableau suivant :
| Instruments de PCR quantitative | Concentration finale du colorant de référence ROX |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/étape un,etc. | 1× (par exemple, ajouter 1μl 20×ROX Reference Dye dans 20 μL de système de réaction) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P et Mx4000, etc. | 0,5 × (par exemple, ajouter 0,5 μl de colorant de référence 20 × ROX dans 20 μL de système de réaction) |
| Instrument PCR Roche, instrument PCR Bio-Rad, instrument PCR quantitatif Eppendorf, etc. | Sans colorant de référence ROX |
Stockage et durée de conservation
Le kit doit être stocké à -20 ± 5℃.Il doit être immédiatement stocké dans un réfrigérateur thermostatique à -20℃.La période de validité est de 2 ans s'il est stocké dans des conditions appropriées.
