Kit d'isolement d'ARN total de plantes Kit de purification d'ARN total pour plantes à faible teneur en polysaccharides et polyphénols
Caractéristiques
50 préparations, 200 préparations
Le kit utilise la colonne de spin et la formule développées par Foregene, qui peuvent extraire efficacement l'ARN total de haute pureté et de haute qualité de divers tissus végétaux à faible teneur en polysaccharides et polyphénols.Pour les échantillons de plantes à haute teneur en polysaccharides ou en polyphénols, il est recommandé d'utiliser le kit Plant Total RNA Isolation Plus pour obtenir de meilleurs résultats d'extraction d'ARN.Le kit fournit la colonne DNA-Cleaning qui peut facilement éliminer l'ADN génomique du surnageant et du lysat tissulaire.La colonne d'ARN uniquement peut lier efficacement l'ARN.Le kit peut traiter un grand nombre d'échantillons en même temps.
L'ensemble du système ne contient pas de RNase, de sorte que l'ARN purifié ne sera pas dégradé.Le tampon PRW1 et le tampon PRW2 peuvent garantir que l'ARN obtenu n'est pas contaminé par des protéines, de l'ADN, des ions et des composés organiques.
Composants du kit
| Tampon PSL1, Tampon PS, Tampon PSL2 |
| Tampon PRW1, Tampon PRW2 |
| ddH sans RNase2O, colonne de nettoyage d'ADN |
| Colonne d'ARN uniquement |
| Instructions |
Fonctionnalités et avantages
■ Fonctionnement à température ambiante (15-25℃) tout au long du processus, sans bain de glace et centrifugation à basse température.
■ Kit complet RNase-Free, pas besoin de s'inquiéter de la dégradation de l'ARN.
■ La colonne de nettoyage d'ADN se lie spécifiquement à l'ADN, de sorte que le kit peut éliminer la contamination de l'ADN génomique sans ajouter de DNase.
■ Rendement élevé d'ARN : la colonne d'ARN uniquement et la formule unique peuvent purifier efficacement l'ARN.
■ Vitesse rapide : facile à utiliser et peut être terminé en 30 minutes.
■ Sécurité : aucun réactif organique n'est nécessaire.
■ Haute qualité : Les fragments d'ARN purifiés sont d'une grande pureté, exempts de protéines et autres impuretés, et peuvent répondre à diverses applications expérimentales en aval.
Demande de kit
Il convient à l'extraction et à la purification de l'ARN total à partir d'échantillons de tissus végétaux frais ou congelés (en particulier de tissus de feuilles de plantes fraîches) à faible teneur en polysaccharides et polyphénols.
Flux de travail
Diagramme
Plant Total RNA Isolation Kit Plus a traité 50 mg de feuilles fraîches de polysaccharides et de polyphénols, et 5 % d'ARN purifié ont été testés par électrophorèse.
1 : Banane
2: Ginkgo
3 : Coton
4 : Grenade
Stockage et durée de conservation
Le kit peut être stocké pendant 12 mois à température ambiante (15–25 ℃) dans un environnement sec, et 2–8 ℃ plus longtemps (24 mois).
Le tampon PSL1 peut être stocké à 4 ℃ pendant 1 mois après l'ajout de 2-hydroxy-1-éthanethiol (facultatif).
Guide d'analyse des problèmes
L'analyse suivante des problèmes que vous pouvez rencontrer dansUsine totaleRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.
La colonne de spin est bouchée
Le blocage de la colonne de centrifugation entraînera une réduction du rendement en ARN ou même une impossibilité de le purifier pour obtenir de l'ARN, et la qualité de l'ARN obtenu sera faible.
Analyse des causes communes :
1. L'échantillon n'est pas complètement cassé.
Une fragmentation incomplète de l'échantillon peut bloquer la colonne de nettoyage d'ADN, ce qui peut également affecter le rendement et la qualité de l'ARN.Lors de la fragmentation des échantillons, nous vous recommandons de broyer rapidement des quantités suffisantes d'azote liquide pour briser autant que possible les tissus tels que les parois cellulaires et les membranes cellulaires des échantillons.Pour les échantillons végétaux de polyphénols polysaccharides, nous vous recommandons d'utiliser Plant Total RNA Isolation Kit Plus.
2.Aspirez le surnageant isolé de la colonne de nettoyage d'ADN, aspirez le culot de débris cellulaires éventuel.
Le culot de débris cellulaires aspiré peut obstruer la colonne d'ARN uniquement pendant les procédures d'adsorption d'ARN (voir l'étape 5 de la procédure, l'étape 6 de la procédure de polyphénol de polysaccharide).Nous recommandons de prendre des précautions lors de l'aspiration de ce surnageant pour éviter l'aspiration de débris cellulaires.
3. La quantité initiale d'échantillon est trop importante.
Une utilisation excessive de l'échantillon entraînera une fragmentation incomplète de l'échantillon ou une lyse incomplète des cellules par le tampon PRL1 ou le tampon PSL1, entraînant une colonne de purification obstruée pour les opérations de purification.Le kit d'isolement d'ARN total pour plantes a un maximum initial de 50 mg par purification unique d'un échantillon opéré.Pour les échantillons végétaux de polyphénols polysaccharides, nous vous recommandons d'essayer le Plant Total RNA Isolation Kit Plus.
4. La température de la centrifugeuse est trop basse.
Isolement et purification de l'ARN entier, à l'exception de la perturbation de l'azote liquide du tissu de l'échantillon, toutes les étapes sont effectuées à température ambiante (20-25 ° C).Certaines centrifugeuses à basse température ont des températures inférieures à 20 °C, ce qui peut provoquer des blocages dans la colonne de nettoyage d'ADN et/ou la colonne d'ARN uniquement.Si cela se produit, réglez la température de la centrifugeuse à 20-25 oC et préchauffez le mélange de lyse et/ou l'ajout de surnageant de séparation d'éthanol à 37 oC.
Aucun ARN extrait ou le rendement en ARN est faible
De nombreux facteurs affectent généralement l'efficacité de la récupération, tels que : la teneur en ARN de l'échantillon, la méthode de fonctionnement, le volume d'élution, etc.
Analyse des causes communes comme ci-dessous :
1.Un bain de glace ou une centrifugation à basse température (4°C) a été effectuée pendant l'opération.
Suggestion : Opérez à température ambiante (15-25°C) dans tout le processus, ne faites pas de bain de glace et de centrifugation à basse température.
2.L'ARN a été dégradé en raison d'une mauvaise conservation de l'échantillon ou d'une conservation à long terme de l'échantillon.
Recommandation : les échantillons fraîchement prélevés doivent être rapidement congelés dans de l'azote liquide, puis stockés à -80 °C pendant une longue période, éviter la congélation et la décongélation répétées des échantillons ;ou trempez immédiatement les échantillons dans une solution de stabilisateur d'ARN RNAlater (échantillons d'animaux).
3.Une fragmentation et une lyse insuffisantes de l'échantillon entraînent le blocage de la colonne de purification.
Suggestion : Lors du broyage du tissu, assurez-vous que le tissu est suffisamment broyé et transférez-le rapidement dans le tampon PSL1 pré-préparé (confirmez que la proportion correcte de β-ME a été ajoutée, voir l'étape 1 de la procédure).
4. L'éluant n'a pas été ajouté correctement.
Suggestion : Assurez-vous que ddH sans RNase2O est versé au milieu de la membrane de la colonne de purification.
5.Le volume correct d'éthanol absolu n'a pas été ajouté au tampon PSL2 ou au tampon PRW2.
Suggestion : Veuillez suivre les instructions, ajouter le volume correct d'éthanol absolu au tampon PSL2 et au tampon PRW2 et bien mélanger avant d'utiliser le kit.
6.La quantité d'échantillon de tissu est inappropriée.
Suggestion : Utiliser 50 mg de tissu pour 500 μl de tampon PSL1.Utiliser trop de tissu réduira la quantité d'ARN extrait et la pureté de l'ARN résultant sera également réduite.Nous recommandons fortement que le dosage initial de l'échantillon ne dépasse pas 50 mg par opération d'extraction d'ARN.
7. Volume d'élution inapproprié ou élution incomplète.
Suggestion : Le volume d'éluant de la colonne de purification est de 50-200 μl ;si l'effet d'élution n'est pas satisfaisant, il est recommandé de prolonger le temps à température ambiante après l'ajout de ddH sans RNase préchauffé2O, comme 5-10min.
8. La colonne de purification contient des résidus d'éthanol après lavage avec le tampon PRW2.
Suggestion : Si le tube vide est centrifugé pendant 1 min et qu'il reste encore de l'éthanol après le lavage dans le tampon PRW2, vous pouvez augmenter le temps de centrifugation du tube vide à 2 min ou placer la colonne de purification à température ambiante pendant 5 min pour éliminer complètement l'éthanol résiduel.
9.Le kit a été utilisé de manière incorrecte.
Suggestion : pour les échantillons de plantes de polysaccharides polyphénoliques, l'utilisation de kits courants tels que le kit d'isolement d'ARN total de plantes peut ne pas être en mesure d'obtenir des échantillons d'ARN idéaux.Nous vous recommandons d'utiliser Plant Total RNA IsolationKit Plus, qui est spécialement conçu pour les échantillons de plantes polysaccharides polyphénoliques.Un kit spécialement développé pour l'extraction d'ARN à partir d'échantillons végétaux de polyphénols et de polysaccharides.
La valeur OD260/OD280 est faible
Élution d'ARN avec ddH2O et utilisé pour les lectures du spectrophotomètre donne de faibles valeurs OD260/OD280.Nous vous recommandons d'utiliser du Tris-HCl 10 mM, pH 7,5 (plutôt que du ddH sans RNase2O pour éluer l'ARN) pour obtenir des valeurs OD260/OD280 relativement correctes, voir « Essais de concentration et de purification de l'ARN » à la page 19.
L'ARN purifié est dégradé
La qualité de l'ARN purifié est liée à des facteurs tels que la conservation de l'échantillon, la contamination par la RNase et la manipulation.
Analyse des causes communes :
1. Les échantillons de tissus n'ont pas été stockés à temps après le prélèvement.
Recommandation : si les échantillons de tissus ne sont pas utilisés à temps après le prélèvement, veuillez les stocker immédiatement dans de l'azote liquide à basse température ou les transférer à -80 °C pour un stockage à long terme après congélation rapide dans de l'azote liquide, ou immergez immédiatement les échantillons dans une solution RNAlater de stabilisateur d'ARN (échantillons d'animaux).Pour l'extraction d'ARN, essayez d'utiliser des échantillons de tissus fraîchement prélevés.
2.Congélation et décongélation répétées d'échantillons de tissus.
Suggestion : lors du stockage des échantillons de tissus, il est préférable de les couper en petits morceaux pour les conserver et d'en retirer une partie lors de leur utilisation pour éviter la dégradation de l'ARN causée par la congélation et la décongélation répétées des échantillons.
3. La RNase est introduite dans la salle d'opération ou des gants jetables non portés, des masques, etc.
Suggestion : Les expériences d'extraction d'ARN sont mieux réalisées dans des opérations d'ARN séparées, et la table de laboratoire doit être nettoyée avant l'expérience, et des gants et des masques jetables doivent être portés pendant l'expérience pour éviter la dégradation de l'ARN causée par l'introduction de RNase dans la plus grande mesure.
4. Le réactif est contaminé par la RNase pendant l'utilisation.
Suggestion : remplacer par une nouvelle série de kits d'extraction d'ARN total de plantes pour des expériences connexes.
5.Les tubes de centrifugation et les embouts de pipette utilisés pour la manipulation de l'ARN sont contaminés par la RNase.
Suggestion : assurez-vous que les tubes à centrifuger, les embouts de pipette, les pipettes, etc. utilisés dans l'extraction d'ARN sont tous exempts de RNase.
Manuels d'utilisation:
Manuel d'instructions du kit d'isolement de l'ARN total des plantes
