Kit Cell Direct RT qPCR—SYBR GREEN I Direct Cell Lysis Cell Ready Kits qRT-PCR en une étape
Descriptions
Ce kit utilise un système de tampon de lyse unique qui peut rapidement libérer l'ARN des échantillons de cellules cultivées pour les réactions RT-qPCR, éliminant ainsi le processus de purification de l'ARN, long et laborieux.La matrice d'ARN peut être obtenue en seulement 7 minutes.Le 5×Direct RT Mix et 2×Les réactifs directs qPCR Mix-SYBR fournis par le kit peuvent obtenir rapidement et efficacement des résultats PCR quantitatifs en temps réel.
5×Direct RT Mix et 2×Direct qPCR Mix-SYBR a une forte tolérance aux inhibiteurs et le lysat des échantillons peut être utilisé directement comme modèle pour la RT-qPCR.Ce kit contient la transcriptase inverse Foregene unique à haute affinité et l'ADN polymérase Hot D-Taq, les dNTP, le MgCl2, tampon de réaction, optimiseur et stabilisateur PCR.
Caractéristiques
200×20μlRxns, 1000×20μlRxns
Composants du kit
| Première partie | Tampon CL |
| Foregene Protéase Plus II | |
| Tampon ST | |
| Partie II | Effaceur d'ADN |
| 5× Mélange RT direct | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | |
| 50 × colorant de référence ROX | |
| ddH2O sans RNase | |
| Instructions | |
Fonctionnalités et avantages
■Simple et efficace : avec la technologie Cell Direct RT, les échantillons d'ARN peuvent être obtenus en seulement 7 minutes.
■ La demande d'échantillon est faible, aussi peu que 10 cellules peuvent être testées.
■ Haut débit : il peut détecter rapidement l'ARN dans les cellules cultivées dans des plaques 384, 96, 24, 12, 6 puits.
■ DNA Eraser peut supprimer rapidement les génomes libérés, réduire considérablement l'impact sur les résultats expérimentaux ultérieurs.
■ Le système RT et qPCR optimisé rend la transcription inverse RT-PCR en deux étapes plus efficace et la PCR plus spécifique et plus résistante aux inhibiteurs de la réaction RT-qPCR.
Demande de kit
Champ d'application : cellules cultivées.
- ARN libéré par lyse d'échantillon : uniquement applicable à la matrice RT-qPCR de ce kit.
- Le kit peut être utilisé aux fins suivantes : analyse de l'expression génique, vérification de l'effet de silençage génique médié par l'ARNsi, criblage de médicaments, etc.
Diagramme
Stockage et durée de conservation
La partie I de ce kit doit être stockée à 4℃ ;La partie II doit être stockée à -20℃.
Foregene Protease Plus II doit être conservé à 4℃, ne pas congeler à -20℃.
Réactif 2×Direct qPCR Mix-SYBR doit être stocké à -20℃dans le noir;s'il est utilisé fréquemment, il peut également être stocké à 4℃ pour un stockage à court terme (utilisation dans les 10 jours).
Principes de conception des amorces PCR en temps réel
Amorce directe et amorce inverse
Pour la PCR en temps réel, la conception des amorces est très importante.Les amorces sont liées à la spécificité et à l'efficacité de l'amplification PCR et peuvent être conçues en référence aux principes suivants :
Longueur de l'amorce : 18-30 pb.
Teneur en GC : 40-60 %.
Valeur Tm : un logiciel de conception d'amorce, tel que Primer 5, peut donner la valeur Tm de l'amorce.Les valeurs Tm des amorces en amont et en aval doivent être aussi proches que possible.La formule de calcul de Tm peut également être utilisée : Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Lors de l'exécution de la PCR, une température inférieure à la valeur Tm de l'amorce de 5 ° C est généralement sélectionnée comme température d'annelage (l'augmentation correspondante de la température d'annelage peut augmenter la spécificité de la réaction PCR).
Amorces et produits PCR :
La longueur du produit d'amplification PCR de l'amorce de conception est de préférence de 100 à 150 pb.
Les amorces de conception dans la zone structurelle secondaire du gabarit doivent être évitées autant que possible.
Éviter la formation de 2 bases complémentaires ou plus entre les extrémités 3' des amorces amont et aval.
La base terminale de l'amorce 3' ne peut pas être présente avec 3 G ou C consécutifs supplémentaires.
Les amorces elles-mêmes ne peuvent pas avoir de structures complémentaires, sinon une structure en épingle à cheveux se formera, affectant l'amplification par PCR.
L'ATCG doit être réparti aussi uniformément que possible dans la séquence d'amorces et la base terminale 3 'doit être évitée comme T.
Annexe 1：Pack supplémentaire de composants du kit Cell Direct RT-qPCR
1.Solution de lyse cellulaire
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| Composants du kit (système de lyse 24 puits / puits) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100T | 500 T | ||
| Partieje | Tampon CL | 20ml | 100ml |
| Foregene Protéase Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Tampon ST | 1 ml × 2 | 10ml | |
| PartieII | Effaceur d'ADN | 400 μl | 1 ml × 2 |
2.RT Mix
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| Composants du kit (système de réaction de 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200T | |
| 5× Mélange RT direct | 800 μl |
| ddH sans RNase2O | 1,7 ml × 2 |
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| Composants du kit (système de réaction de 20 μl) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200T | 1000T | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 50 × colorant de référence ROX | 40 μl | 200 μl |
| ddH sans RNase2O | 1,7 ml | 10ml |
Manuels d'utilisation:
