(96 puits) Kit QuickEasy Cell Direct RT-qPCR – Taqman
Descriptions
Le(96 puits) QuickEasyTM Kit de RT-qPCR Cell Direct–Taqmanfournitun système de tampon de lyse uniqueto libère rapidement l'ARNà partir de cellules cultivéeséchantillons pour les réactions RT-qPCR, éliminant ainsi les étapes chronophages et laborieusesprocessus de purification d'ARN, et ne prend que 7 minutes pour obtenir la matrice d'ARN requise.Le5× Mélange RT directet2× Direct qPCR Mix-SYBRfourni dans la boîte peut rapidement etobtenir efficacement des données quantitatives en temps réelRésultats PCR.
5× Direct RT Mix et 2× Direct qPCR Mix-Taqman ont une forte tolérance aux inhibiteurs et peuvent utiliser le lysat de l'échantillon à tester comme modèle pour une transcription inverse efficace et une amplification spécifique.Le réactif contient la transcriptase inverse unique de Foregene avec une haute affinité pour l'ARN, ainsi que l'ADN polymérase Hot D-Taq, les dNTP, le MgCl2 , tampon de réaction, optimiseur et stabilisateur PCR, et peut être utilisé en conjonction avec le tampon de lyse pour détecter l'échantillon rapidement, facilement et avec précision, et il présente les caractéristiques d'une sensibilité élevée, d'une forte spécificité et d'une bonne stabilité.
Le kit est destiné à la lyse du micro-système de cellules cultivées à 96 puits et présente une bonne uniformité et consistance ;les composants du kit fournissent 96 réactions de lyse, 96 réactions de transcription inverse et 96 × 2 réactions qPCR, qui peuvent rencontrer la plaque de cellules à 96 puits pour une utilisation unique, évitant la pollution causée par l'ouverture, la congélation et la décongélation répétées des réactifs et la dégradation des performances des réactifs.
Composants du kit
| Composition du kit ( 50 μSystème de lyse L/20 μLRT système de réaction /20μSystème de réaction L qPCR) | DRT-03021 | Remarque | |
| 96T | |||
| PartieI | AmortirCL | 5 ml | CelluleLyse |
| PrégèneProtéase Plus II | 100 μL | ||
| AmortirST | 500 μL | ||
| Partie II | ADNGomme | 100 μL | |
| 5× Mélange RT direct | 400 μL | RT | |
| 2 × Mélange qPCR direct-Taqman | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50 × colorant de référence ROX | 400µL | ||
| RNase- GratuitjjH2 O | 1,7 ml |
| |
| Manuel | 1 pièce | 1 portion | |
*: Le réactif de lyse DNA Eraser est inclus dans la partie II du kit ;Les composants Cell Lysis, RT et qPCR peuvent être achetés séparément.
Fonctionnalités et avantages
■Simple et efficace : avec la technologie Cell Direct RT, les échantillons d'ARN peuvent être obtenus en seulement 7 minutes.
■ La demande d'échantillon est faible, aussi peu que 10 cellules peuvent être testées.
■ Haut débit : il peut détecter rapidement l'ARN dans les cellules cultivées dans des plaques 384, 96, 24, 12, 6 puits.
■ DNA Eraser peut supprimer rapidement les génomes libérés, réduire considérablement l'impact sur les résultats expérimentaux ultérieurs.
■ Le système RT et qPCR optimisé rend la transcription inverse RT-PCR en deux étapes plus efficace et la PCR plus spécifique et plus résistante aux inhibiteurs de la réaction RT-qPCR.
Demande de kit
Champ d'application : cellules cultivées.
- ARN libéré par lyse d'échantillon : uniquement applicable à la matrice RT-qPCR de ce kit.
- Le kit peut être utilisé aux fins suivantes : analyse de l'expression génique, vérification de l'effet de silençage génique médié par l'ARNsi, criblage de médicaments, etc.
Stockage et durée de conservation
La partie I de ce kit doit être stockée à 4℃;La partie II doit être stockée à -20℃.
Foregene Protease Plus II doit être conservé à 4℃, ne pas congeler à -20℃.
Réactif 2×Direct qPCR Mix-Taqman doit être stocké à -20℃dans le noir;s'il est utilisé fréquemment, il peut également être stocké à 4℃ pour un stockage à court terme (utilisation dans les 10 jours).
Principes de conception des amorces PCR en temps réel
Amorce directe et amorce inverse
Pour la PCR en temps réel, la conception des amorces est très importante.Les amorces sont liées à la spécificité et à l'efficacité de l'amplification PCR et peuvent être conçues en référence aux principes suivants :
- Longueur de l'amorce : 18-30 pb.
- Teneur en GC : 40-60 %.
- Valeur Tm : un logiciel de conception d'amorce, tel que Primer 5, peut donner la valeur Tm de l'amorce.Les valeurs Tm des amorces en amont et en aval doivent être aussi proches que possible.La formule de calcul de Tm peut également être utilisée : Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Lors de l'exécution de la PCR, une température inférieure à la valeur Tm de l'amorce de 5 ° C est généralement sélectionnée comme température d'annelage (l'augmentation correspondante de la température d'annelage peut augmenter la spécificité de la réaction PCR).
- Amorces et produits PCR :
- La longueur du produit d'amplification PCR de l'amorce de conception est de préférence de 100 à 150 pb.
- Les amorces de conception dans la zone structurelle secondaire du gabarit doivent être évitées autant que possible.
- Éviter la formation de 2 bases complémentaires ou plus entre les extrémités 3' des amorces amont et aval.
- La base terminale de l'amorce 3' ne peut pas être présente avec 3 G ou C consécutifs supplémentaires.
- Les amorces elles-mêmes ne peuvent pas avoir de structures complémentaires, sinon une structure en épingle à cheveux se formera, affectant l'amplification par PCR.
- L'ATCG doit être réparti aussi uniformément que possible dans la séquence d'amorces et la base terminale 3 'doit être évitée comme T.
annexe1：Cell DirectRT-qPCR Composant du kitt supplément pack
1. Solution de lyse cellulaire
| Solution de lyse cellulaire | |||
| Composants du kit (système de lyse 24 puits / puits) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100T | 500 T | ||
| Partieje | Tampon CL | 20ml | 100ml |
| Foregene Protéase Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Tampon ST | 1 ml × 2 | 10ml | |
| PartieII | Effaceur d'ADN | 400 μl | 1 ml × 2 |
| Mélange RT | |
| Composants du kit (système de réaction de 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200T | |
| 5× Mélange RT direct | 800 μl |
| ddH sans RNase2O | 1,7 ml × 2 |
| Mélange qPCR | ||
| Composants du kit (système de réaction de 20 μl) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200T | 1000T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20 × colorant de référence ROX | 40 μl | 200 μl |
| ddH sans RNase2O | 1,7 ml | 10ml |
Manuels d'utilisation:
