Pas de signaux d'amplification

1. L'ADN polymérase Taq dans le kit perd son activité en raison d'un stockage inapproprié ou de l'expiration du kit.
Recommandation : Confirmer les conditions de stockage du kit ;ajoutez à nouveau une quantité appropriée d'ADN polymérase Taq au système de PCR ou achetez un nouveau kit de PCR en temps réel pour les expériences associées.

2. Il existe de nombreux inhibiteurs de la Taq ADN polymérase dans la matrice d'ADN.
Suggestion : purifiez à nouveau le modèle ou réduisez la quantité de modèle utilisée.

3.La concentration de Mg2+ n'est pas adaptée.
Recommandation : La concentration en Mg2+ du 2× Real PCR Mix que nous fournissons est de 3,5 mM.Cependant, pour certaines amorces et matrices spéciales, la concentration de Mg2+ peut être plus élevée.Par conséquent, vous pouvez directement ajouter du MgCl2 pour optimiser la concentration de Mg2+.Il est recommandé d'augmenter le Mg2+ 0,5 mM à chaque fois pour l'optimisation.

4.Les conditions d'amplification par PCR ne sont pas adaptées et la séquence ou la concentration de l'amorce est incorrecte.
Suggestion : confirmez l'exactitude de la séquence de l'amorce et l'amorce n'a pas été dégradée ;si le signal d'amplification n'est pas bon, essayez d'abaisser la température de recuit et d'ajuster la concentration d'amorce de manière appropriée.

5.La quantité de modèle est trop petite ou trop importante.
Recommandation : Effectuez une dilution du gradient de linéarisation du modèle et sélectionnez la concentration du modèle avec le meilleur effet PCR pour l'expérience PCR en temps réel.

Le NTC a une valeur de fluorescence trop élevée

1.Contamination des réactifs causée pendant le fonctionnement.
Recommandation : remplacer par de nouveaux réactifs pour les expériences de PCR en temps réel.

2. Une contamination s'est produite lors de la préparation du système de réaction PCR.
Recommandation : Prenez les mesures de protection nécessaires pendant le fonctionnement, telles que : port de gants en latex, utilisation d'une pointe de pipette avec filtre, etc.

3. Les amorces sont dégradées et la dégradation des amorces entraînera une amplification non spécifique.
Suggestion : utilisez l'électrophorèse SDS-PAGE pour détecter si les amorces sont dégradées et remplacez-les par de nouvelles amorces pour les expériences de PCR en temps réel.

Dimère d'amorce ou amplification non spécifique

1.La concentration de Mg2+ n'est pas adaptée.
Recommandation : La concentration en Mg2+ du 2× Real PCR EasyTM Mix que nous fournissons est de 3,5 mM.Cependant, pour certaines amorces et matrices spéciales, la concentration de Mg2+ peut être plus élevée.Par conséquent, vous pouvez directement ajouter du MgCl2 pour optimiser la concentration de Mg2+.Il est recommandé d'augmenter le Mg2+ 0,5 mM à chaque fois pour l'optimisation.

2.La température de recuit PCR est trop basse.
Suggestion : Augmentez la température de recuit PCR de 1℃ ou 2℃ à chaque fois.

3.Le produit PCR est trop long.
Recommandation : La longueur du produit PCR en temps réel doit être comprise entre 100 et 150 bp, pas plus de 500 bp.

4. Les amorces sont dégradées et la dégradation des amorces conduira à l'apparition d'une amplification spécifique.
Suggestion : utilisez l'électrophorèse SDS-PAGE pour détecter si les amorces sont dégradées et remplacez-les par de nouvelles amorces pour les expériences de PCR en temps réel.

5. Le système PCR est incorrect ou le système est trop petit.
Suggestion : Le système de réaction PCR est trop petit entraînera une diminution de la précision de détection.Il est préférable d'utiliser le système de réaction recommandé par l'instrument de PCR quantitative pour relancer l'expérience de PCR en temps réel.

Mauvaise répétabilité des valeurs quantitatives

1. L'instrument fonctionne mal.
Suggestion : Il peut y avoir des erreurs entre chaque trou PCR de l'instrument, ce qui entraîne une mauvaise reproductibilité lors de la gestion ou de la détection de la température.Veuillez vérifier selon les instructions de l'instrument correspondant.

2. La pureté de l'échantillon n'est pas bonne.
Recommandation : Les échantillons impurs conduiront à une mauvaise reproductibilité de l'expérience, qui inclut la pureté du modèle et des amorces.Il est préférable de repurifier la matrice et les amorces sont mieux purifiées par SDS-PAGE.

3. Le temps de préparation et de stockage du système PCR est trop long.
Suggestion : utilisez le système PCR en temps réel pour l'expérience PCR immédiatement après la préparation et ne le laissez pas de côté trop longtemps.

4.Les conditions d'amplification par PCR ne sont pas adaptées et la séquence ou la concentration de l'amorce est incorrecte.
Suggestion : confirmez l'exactitude de la séquence de l'amorce et l'amorce n'a pas été dégradée ;si le signal d'amplification n'est pas bon, essayez d'abaisser la température de recuit et d'ajuster la concentration d'amorce de manière appropriée.

5. Le système PCR est incorrect ou le système est trop petit.
Suggestion : Le système de réaction PCR est trop petit entraînera une diminution de la précision de détection.Il est préférable d'utiliser le système de réaction recommandé par l'instrument de PCR quantitative pour relancer l'expérience de PCR en temps réel.