Guide d'analyse des problèmes

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

Faible rendement ou pas d'ADN

De nombreux facteurs affectent généralement le rendement de l'ADN génomique, notamment la source de l'échantillon, l'âge de l'échantillon, les conditions de stockage de l'échantillon et l'opération.

L'ADN génomique n'a pas pu être obtenu lors de l'extraction

1. Les échantillons de tissus sont mal conservés ou conservés trop longtemps, ce qui entraîne la dégradation de l'ADN génomique.

Recommandation : stocker les échantillons de tissus dans de l'azote liquide ou -20°C;essayer d'utiliser des échantillons nouvellement collectés pour l'extraction d'ADN génomique.

2. Une quantité d'échantillon trop faible peut empêcher l'extraction de l'ADN génomique correspondant.

Suggestion : pour les échantillons de tissus qui ont été stockés pendant une longue période ou qui présentent une grave dégradation de l'ADN génomique, la quantité d'échantillons de tissus peut être augmentée de manière appropriée afin d'extraire une quantité considérable d'ADN génomique.La quantité d'échantillon peut être déterminée en fonction des besoins en ADN, mais l'échantillon frais ne doit pas dépasser 100 mg et l'échantillon sec ne doit pas dépasser 30 mg.

3. L'échantillon n'est pas broyé avec de l'azote liquide ou placé trop longtemps après l'azote liquide.

Suggestion : pendant l'extraction de l'ADN, l'échantillon doit être entièrement broyé avec de l'azote liquide pour briser la paroi cellulaire ;après broyage, veuillez transférer l'échantillon de poudre à PL1 préchauffé à 65°C dès que possible (une fois la poudre broyée fondue, l'ADN génomique commencera à se dégrader rapidement) .

4. Un stockage incorrect de Foregene Protease entraîne une activité réduite ou inactivée.

Recommandation : Confirmer les conditions de stockage de la Foregene Protease ou la remplacer par une nouvelle Foregene Protease pour l'hydrolyse enzymatique.

5. Le kit est mal stocké ou stocké trop longtemps, provoquant la défaillance de certains composants du kit.

Recommandation : Achetez un nouveau kit d'extraction d'ADN génomique végétal pour les opérations connexes.

6. Mauvaise utilisation du kit.

Suggestion : Achetez un kit d'isolement d'ADN végétal dédié aux échantillons pour l'extraction et la purification de l'ADN génomique végétal.

7. Buffer WB sans ajouter denhydre l'éthanol.

Recommandation : Assurez-vous d'ajouter le volume correct d'éthanol absolu au Buffer WB.

8. L'éluant n'a pas coulé correctement sur la membrane de silice.

Suggestion : Ajouter l'éluant préchauffé à 65℃goutte à goutte au milieu de la membrane de gel de silice et laissez-la à température ambiante pendant 5 minutes pour augmenter l'efficacité de l'élution.

Extraction pour obtenir de l'ADN génomique à faible rendement

1. L'échantillon est mal stocké ou stocké trop longtemps, ce qui entraîne la dégradation de l'ADN génomique.

Recommandation : stocker les échantillons de tissus à -20℃;essayer d'utiliser des échantillons de tissus nouvellement collectés pour l'extraction d'ADN génomique.

2. Si la quantité d'échantillons de tissus est trop petite, l'ADN génomique extrait sera moindre.

Suggestion : Certains échantillons de plantes sont riches en eau, comme les plantes aquatiques telles que les algues, etc., le dosage peut être augmenté de manière appropriée ou l'eau peut être déshydratée un peu avant l'opération.

3. Les échantillons n'ont pas été soigneusement broyés avec de l'azote liquide ou ont été laissés trop longtemps à température ambiante après le broyage.

Suggestion : Le broyage à l'azote liquide doit être suffisant et la paroi cellulaire de l'échantillon doit être brisée autant que possible ;immédiatement après le broyage, l'échantillon de poudre doit être transféré à 65℃Tampon PL1 préchauffé pour l'étape suivante.

4. Ne pas utiliser le bon kit.

Recommandation : Utilisez un kit d'isolement d'ADN végétal dédié pour extraire et purifier l'ADN génomique végétal.

5. Un stockage incorrect de Foregene Protease entraîne une activité réduite ou inactivée.

Recommandation : Confirmer les conditions de stockage de la Foregene Protease ou la remplacer par une nouvelle Foregene Protease pour l'hydrolyse enzymatique.

6. Problème d'éluant

Recommandation : Veuillez utiliser le tampon EB pour l'élution ;si vous utilisez ddH₂O ou d'autres éluants, assurez-vous que le pH de l'éluant est compris entre 7,0 et 8,5.

7. L'éluant ne coule pas correctement

Suggestion : veuillez ajouter la goutte d'élution au milieu de la membrane de silice et la laisser à température ambiante pendant 5 minutes pour augmenter l'efficacité de l'élution.

8. Le volume d'éluant est trop petit

Suggestion : veuillez utiliser l'éluant pour l'élution de l'ADN génomique conformément aux instructions, au moins pas moins de 100μl.

ADN génomique extrait de faible pureté

La faible pureté de l'ADN génomique entraînera l'échec ou le mauvais effet des expériences en aval, telles que : l'enzyme ne peut pas être coupée et le fragment de gène cible ne peut pas être obtenu par PCR.

1. Contamination de protéines diverses, contamination d'ARN.

Analyse : le tampon PW n'a pas été utilisé pour laver la colonne ;Le tampon PW n'a pas été utilisé pour laver la colonne à la vitesse de centrifugation correcte.

Suggestion : essayer de s'assurer qu'il n'y a pas de précipitation dans le surnageant lorsque le surnageant est passé à travers la colonne ;assurez-vous de laver la colonne de purification avec le tampon PW conformément aux instructions, et cette étape ne peut pas être omise.

2. Pollution par les ions d'impuretés.

Analyse : La colonne de lavage Buffer WB a été omise ou n'a été lavée qu'une seule fois, ce qui a entraîné une contamination ionique résiduelle.

Recommandation : assurez-vous de laver deux fois avec le tampon WB conformément aux instructions pour éliminer autant que possible les ions résiduels.

3. Contamination par RNase.

Analyse : la RNase exogène est ajoutée au tampon ;une opération de lavage incorrecte dans le tampon PW entraînera une RNase résiduelle et affectera les opérations expérimentales d'ARN en aval, telles que la transcription in vitro.

Suggestion : les kits d'extraction d'acide nucléique de la série Foregene peuvent éliminer l'ARN sans RNase supplémentaire, et tous les réactifs du kit d'isolement d'ADN végétal n'ont pas besoin de RNase ;assurez-vous de laver la colonne de purification avec le tampon PW conformément aux instructions, et cette étape ne peut pas être omise.

4. Résidus d'éthanol.

Analyse : Après avoir lavé la colonne de purification avec le tampon WB, aucune centrifugation de tube vide n'a été effectuée.

Recommandation : Suivez les instructions pour une centrifugation correcte des tubes vides.

Manuel d'instructions:

Manuel d'instructions du kit d'isolement d'ADN végétal