Le faible rapport A260/A230 est généralement causé par des impuretés dont la longueur d'onde d'absorption maximale est de 230 nm.Voyons ce que ces impuretés comprennent :

• Polluants courants	Longueur d'onde d'absorption	Effet de ratio
  Protéine	~230nm et 280nm	Réduction simultanée de A260/A 280et un260/A 280rapports
  Sel de guanidine	220-240 nm	Réduire le A260/A 280rapport
  Phénol	~270nm	-
  Trizole	~230nm et 270nm	Réduire le A260/A 280rapport
  EDTA	~230nm	Réduire le A260/A 280rapport
  Éthanol	230-240 nm	Réduire le A260/A 280rapport

 
 
 
Longueur d'onde d'absorption et valeur de contraste des polluants courants

Pcontamination par les protéines
La pollution par les protéines peut être considérée comme la pollution la plus courante dans le processus d'extraction des acides nucléiques.La protéine existe entre la phase aqueuse supérieure et la phase inférieureBIOphase .La pollution réduira simultanément le rapport A260/A280 et A260/A230, et le rapport A260/A230 changera plus nettement que le rapport A260/A280.
Au cours destranscription inverséeor Réactions qPCR, les résidus protéiques peuvent inhiber ou interférer avec la fonction enzymatique.La meilleure façon d'éviter la contamination par les protéines est de garder à l'esprit le principe « plutôt moins que plus, une petite quantité plusieurs fois » lors de l'aspiration du surnageant.

2. Pollution au guanidinium
Le chlorhydrate de guanidine (GuHCl) et le thiocyanate de guanidine (GTC) ont pour effet de dénaturer les protéines, ce qui peut rapidement détruire les membranes cellulaires lors du processus d'extraction des acides nucléiques, provoquant une dénaturation et une précipitation des protéines.La longueur d'onde d'absorption du GuHCl et du GTC est comprise entre 220 et 240 nm, et lale sel de guanidinium résiduel réduira le rapport A260/A230.Bien que le sel de guanidinium résiduel réduise le rapport,l'impact sur les expériences en aval est en fait négligeable.

3. Contamination par le trizol
Le composant principal du Trizol est le phénol.La fonction principale du phénol est de lyser les cellules et de libérer des protéines et des substances d'acide nucléique dans les cellules.Bien que le phénol puisse dénaturer efficacement les protéines, il ne peut pas inhiber complètement l'activité RNase.Par conséquent, la 8-hydroxyquinoléine, l'isothiocyanate de guanidine, le β-mercaptoéthanol, etc. sont ajoutés au TRIzol pour inhiber la RNase endogène et exogène.
Lors de l'extraction de l'ARN cellulaire, le Trizol peut rapidement lyser les cellules et inhiber la nucléase libérée par les cellules, et le Trizol résiduel réduira considérablement le rapport A260/A230.
Méthode de traitement : lors de la centrifugation, il convient de noter que le phénol du Trizol est facilement soluble dans la phase aqueuse dans des conditions de 4 ° et de température ambiante.

4. Résidu d'éthanol
L'éthanol est utilisé dans le processus final pour précipiter l'ADN tout en dissolvant les ions de sel qui peuvent être liés à l'ADN.La longueur d'onde d'absorption de la plus hautepic d'absorption del'éthanol est également à 230-240 nm, ce quiréduira également le ratio A260/A230.
La méthode pour éviter les résidus d'éthanol peut être répétée deux fois lors de l'élution finale, en soufflant dans lehotte aspirantependant deux minutes pour permettre à l'éthanol de s'évaporer complètement avant d'ajouter le tampon d'élution.
Cependant, il faut savoir que le ratio n'est qu'un indice d'évaluation de la qualité de l'ARN.Si les opérations mentionnées ci-dessus sont strictement réglementées, l'écart entre le rapport et la gamme standard n'aura pas un grand impact sur les expériences en aval.
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