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À propos de Nextraction d'acide nucléique

Le début et la fin de l'acide nucléique purifié

Tout est difficile au début, l'acide nucléique purifié est le plus

Initiation d'expériences moléculaires, pour des expériences ultérieures

Le succès ou l'échec a un impact crucial.

Le spectrophotomètre UV trace/ultra-trace est préféré par de nombreux chercheurs scientifiques car il peut détecter la concentration d'acide nucléique et les résidus de protéines et d'ions de sel simplement, rapidement et économiquement.

Comme nous le savons tous, A260 signifie valeur OD d'absorbance d'acide nucléique, A280 signifie valeur OD d'absorbance de concentration de protéines, A230 signifie valeur OD d'absorbance de concentration d'ions de sel, donc A260 peut convertir la concentration d'acide nucléique, A260/280 signifie résidu de protéine, A260/230 signifie résidu d'ion de sel, mais ce n'est qu'une règle découverte par des chercheurs sur la base d'un grand nombre de résultats de mesure, et c'est "conventionnel” à croire qu'il peut expliquer la pureté de l'ADN et de l'ARN àDans une certaine mesure.Ce n'est pas le seul étalon pour l'identification du rendement et de la pureté des acides nucléiques, il n'est utilisé que comme référence et ce n'est pas un «étalon-or».

Le manuel Thermo Fisher ND-2000 met l'accent sur la fiabilité des résultats des tests

La raison en est que les résultats obtenus en utilisant un spectrophotomètre UV micro/ultramicro ne reflètent que le rendement et la pureté de l'acide nucléique du côté, et il existe de nombreux facteurs d'influence (chemin optique, volume de l'échantillon, concentration de l'échantillon, valeur du pH, autres ions qui affectent la mesure de l'absorbance, etc.) , la valeur OD mesurée n'est pas nécessairement précise.Dans le même temps, en raison du manque de spécificité du matériau de détermination de la valeur d'absorbance, l'ADN simple brin, l'ADN double brin, l'ARN, les dNTP et certaines protéines ont tous des pics d'absorption à une longueur d'onde de 260 nm, et la concentration déterminée par A260 seul n'est pas nécessairement le véritable ADN ou ARN.La concentration, son intégrité et sa dégradation ne peuvent être jugées.

Alors comment juger de la qualité de notre acide nucléique purifié ?Outre l'utilisation d'un spectrophotomètre UV micro/ultramicro pour la détection, des méthodes telles que l'électrophorèse sur gel d'agarose sont également nécessaires pour afficher visuellement la pureté et l'intégrité de l'acide nucléique et pour indiquer la concentration dans une certaine mesure.De cette manière, le rendement et la pureté des acides nucléiques obtenus à partir des résultats de détection de diverses méthodes sont crédibles.

Comparaison des graphiques expérimentaux

L'ADN génomique des cellules H1299 a été extrait à l'aide des kits d'extraction d'ADN de la société A, et une contamination importante par des impuretés a été observée, entraînant des valeurs de DO élevées

(valeur de mesure DO et électrophérogramme correspondant)

Indice d'évaluation

Existe-t-il une « norme de référence » pour les tests de rendement et de qualité des acides nucléiques ?

A notre connaissance, il n'existe pas de méthode simple, rapide et bon marché.Qu'il s'agisse d'un spectrophotomètre, d'une électrophorèse sur gel ou d'une spectrométrie de masse, ils reflètent tous la concentration et la pureté de l'acide nucléique dans la solution sous différents aspects, et ils doivent être jugés en se référant les uns aux autres.

Le meilleur indice d'évaluation est toujoursl'application expérimentale de suivi.Cela n'affecte pas l'efficacité de la transcription inverse et de l'amplification par PCR.L'obtention de produits d'amplification et de valeurs Ct fiables et l'obtention d'une séquence complète par séquençage constituent une extraction d'acide nucléique réussie.

Pour résumer, le point de vue de la théorie du rapport uniquement devrait être remis en question par le point de vue « d'utiliser de bons résultats expérimentaux en aval comme de bons paramètres d'extraction » !

Kits d'extraction Foregene DNA RNA recommandés pour obtenir une haute pureté ADN/ARN :

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