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ARN long non codant, lncRNA est un ARN non codant d'une longueur supérieure à 200 nucléotides, généralement comprise entre 200 et 100 000 nt.lncRNA régule l'expression des gènes aux niveaux épigénétique, transcriptionnel et post-transcriptionnel, et participe au silençage du chromosome X, à l'empreinte du génome et à la modification de la chromatine, à l'activation de la transcription, à l'interférence de la transcription, au transport nucléaire, à la régulation du cycle cellulaire, à la régulation de la différenciation cellulaire et aux effets de compensation de dose (effet de compensation de dosage) et de nombreux autres processus de régulation importants sont étroitement liés à l'apparition, au développement et à la prévention des maladies humaines, et sont actuellement l'un des points chauds dans le domaine de la biomédecine.

01  Types et caractéristiques des LncRNA

lncRNA est divisé en plusieurs types selon les différentes sources de sa formation, comme le montre la figure ci-dessus.A les caractéristiques suivantes :

1. Les lncARN sont généralement plus longs, avec une expression dynamique et différentes méthodes d'épissage lors de la différenciation
2. Comparé aux gènes codants, l'ARNlnc a généralement un niveau d'expression inférieur
3. La plupart des lncRNA ont une spécificité d'expression temporelle et spatiale évidente dans le processus de différenciation et de développement des tissus
4. Il existe des expressions caractéristiques dans les tumeurs et autres maladies
5. Les emplacements subcellulaires de l'ARNlnc sont divers
6. La séquence a une faible conservation, mais la fonction a un certain degré de conservation, etc.

02 Foire aux questions sur la transcription inverse de LncRNA

En raison de la faible teneur en ARNlnc dans les cellules, de leur longueur et de leur structure de haut niveau, cet ARN a souvent des structures complexes telles que des boucles de tige ou des épingles à cheveux, et la RT-qPCR est sujette à des problèmes de transcription inverse infructueuse ou de faible efficacité.

03 Solution de transcription inverse LncRNA

Dans la règle centrale, le processus des virus à ARN utilisant leur propre transcriptase inverse pour synthétiser l'ADN en utilisant l'ARN comme matrice est appelé transcription inverse.Le processus d'utilisation de la transcriptase inverse du virus à ARN pour synthétiser une matrice d'ADNc in vitro est appelé transcription inverse.Les principaux éléments inclus dans le système de transcription inverse : matrice d'ARN, transcriptase inverse, amorces et autres composants.

1.Modèle d'ARN

L'influence de la matrice d'ARN sur la transcription inverse se reflète dans sa structure, sa pureté et son intégrité.Plus la pureté et l'intégrité de l'ARN extrait sont élevées, plus l'efficacité de la transcription inverse est élevée et plus les résultats quantitatifs ultérieurs sont précis.L'ARN purifié par les réactifs d'extraction d'ARN couramment utilisés contient souvent des résidus d'alcool et de sels de guanidine, qui ont un fort effet inhibiteur sur la plupart des transcriptases inverses.

2. Transcriptase inverse

La transcriptase inverse a une influence clé dans l'ensemble du système de transcription inverse.La température appropriée pour la transcriptase inverse utilisée dans la plupart des laboratoires est généralement de 42°C.En effet, l'ouverture de la structure d'ARN de haut niveau nécessite une température plus élevée, et les besoins en transcriptase inverse sont plus élevés.

3.Apprêt

Les amorces de transcription inverse comprennent les amorces spécifiques au gène, les amorces aléatoires et les amorces Oligo dT.La plupart des lncRNAs ne contiennent pas de queues polyA, et il est important de faire correspondre correctement les amorces aléatoires avec Oligo dT.

4.Autres composants

Compte tenu du fait que l'ARN est particulièrement facile à dégrader, l'introduction de composants dans le système de transcription inverse peut être minimisée, ce qui peut empêcher efficacement l'entrée de RNase et assurer le bon déroulement de la transcription inverse.

Forogèneobtient à partir de la matrice d'ARN, transcription inverse en qPCR

Accompagner de manière complète votre détection d'ARNlnc

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Aavantages ofExtraction d'ARN :

Le kit utilise la technologie d'extraction d'ARN de troisième génération, pas besoin d'utiliser de DNase.

11 minutes à partir de cellules cultivées sur plaque de 96, 24, 12 et 6 puits, extraction à haute efficacité de l'ARN cellulaire total sans ADNg, de haute pureté et de haute qualité.

Avantages de la transcription inverse de l'ARNlnc :

Un système de transcription inverse spécialement développé pour LncRNA pour éliminer rapidement la contamination de l'ADN génomique.

Le système de transcription inverse a une stabilité thermique élevée et a toujours de bonnes performances de transcription inverse à 50°C.

Les modèles à haute teneur en GC et à structure secondaire complexe peuvent être inversés avec une grande efficacité.

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La Foregene Taq Polymerase à démarrage à chaud a une efficacité d'amplification plus élevée, une sensibilité d'amplification plus élevée et une spécificité d'amplification plus élevée

Le Real PCR Easy Mix optimisé confère au SYBR Green I une sensibilité de détection plus élevée et son intensité de fluorescence est 3 à 5 fois supérieure à celle de produits similaires, ce qui peut répondre aux besoins de différents types d'expériences quantitatives de fluorescence.