Les méthodes de PCR et la contamination par les aérosols d'acides nucléiques dans les laboratoires de test d'acides nucléiques sont comme les deux faces d'une pièce de monnaie.Nous pouvons seulement choisir de l'avoir ou non, mais nous ne pouvons pas choisir si nous le voulons ou si nous le dépensons.

1. Dépistage de dissolvant d'ADN

Pour obtenir l'élimination spatiale de la contamination par aérosol d'acide nucléique, il est d'abord nécessaire de filtrer les agents de suppression d'ADN qui peuvent éliminer les acides nucléiques à l'état liquide.Parce qu'il n'y a pas beaucoup de dissolvants d'ADN qui fonctionnent vraiment.Pour la méthode expérimentale, veuillez vous référer à : DNA remover ne peut pas être un "coin secret" du laboratoire !

Dans cette expérience, 100 copies/μL (CT environ 31) de plasmide ASFV et de dissolvant d'ADN quantifiés par PCR numérique ont été mélangés en volumes égaux, puis mis à réagir à température ambiante pendant 10 min, 20 min et 30 min respectivement.Après extraction des acides nucléiques, une amplification qPCR a été réalisée.Un contrôle positif mélangé avec du plasmide et de l'eau a été comparé.Étant donné que l'expérience n'a pas été terminée en même temps, il peut y avoir un certain écart entre les résultats, mais cela n'affecte pas la conclusion de l'expérience.Jusqu'à présent, j'ai évalué 10 produits commerciaux de suppression de l'ADN.Seuls les produits n°1, n°6 et n°8 peuvent dégrader efficacement l'ADN plasmidique à l'état liquide.Les autres produits n'ont presque aucun effet.

Tableau 1 Effet d'élimination des acides nucléiques d'un dissolvant d'ADN disponible dans le commerce

2. L'expérience de l'effet d'élimination de l'ADN des désinfectants couramment utilisés

1. Dépistage des désinfectants couramment utilisés

Il existe de nombreux types de désinfectants couramment utilisés dans les laboratoires : aldéhydes, phénols, alcools, sels d'ammonium quaternaire, peroxydes, préparations chlorées, acides et bases.Les effets désinfectants de ces désinfectants sur les micro-organismes ont été entièrement vérifiés par des expériences, mais il n'existe pas de données expérimentales suffisantes sur l'effet de dégradation des acides nucléiques.Les laboratoires d'analyse des acides nucléiques ont besoin d'un désinfectant qui non seulement a un bon effet désinfectant sur les micro-organismes, mais qui peut également dégrader l'ADN.Les résultats des tests montrent que seules deux préparations chlorées de désinfectant 84 et d'acide trichloroisocyanurique et d'acide chlorhydrique 1 M satisfont aux exigences.Étant donné que l'acide chlorhydrique 1 M est très corrosif, il est recommandé d'utiliser des préparations chlorées comme élimination des déchets dans les laboratoires d'analyse des acides nucléiques.Cependant, les préparations chlorées sont corrosives pour les métaux et ne peuvent pas être utilisées pour la désinfection des instruments et du matériel.

Tableau 2 Effets d'élimination de l'ADN de différents types de désinfectants

2. La concentration efficace minimale des préparations chlorées

Les désinfectants à base de chlore ont un fort effet de dégradation de l'ADN, mais en raison de leur corrosivité et de leur irritation des métaux, ils peuvent être utilisés pour nettoyer le sol, les plans de travail non métalliques, les embouts de trempage, les tubes à centrifuger et d'autres éléments de test.

Selon les « nouvelles directives techniques de désinfection de l'épidémie de pneumonie coronarienne » : Polluants (sang, sécrétions et vomissements des patients) chlore disponible 5g/L-10g/L désinfectant contenant du chlore ;les sols, les murs et les surfaces des objets utilisent du chlore disponible 1g/L Désinfectant au chlore : les vêtements, la literie et les autres textiles sont d'abord trempés dans un désinfectant au chlore avec 0,5 g/L de chlore disponible pendant 30 minutes, puis nettoyés comme d'habitude.

Tableau 3 Effet d'élimination de l'ADN de différentes concentrations de désinfectant chloré

Les résultats des tests montrent que : lorsque la concentration efficace en chlore est supérieure ou égale à 1,2 g/L, le désinfectant chloré peut complètement dégrader 100 copies/μL de plasmide lorsqu'il est utilisé pendant 5 minutes.En agissant pendant 10 minutes, 84 désinfectant avec une concentration efficace en chlore supérieure ou égale à 0,6 g/L peut complètement dégrader 100 copies/μL de plasmides.

3. Expérience d'élimination de l'air pollué par un aérosol d'acide nucléique

Comment assainir l'air pollué par les aérosols d'acides nucléiques ?La plupart des idées sont de créer un environnement contaminé par des aérosols, puis de le nettoyer, ou de nettoyer les acides nucléiques après contamination.Pour moi, une expérience qui ne peut pas être répétée et les résultats de l'expérience ne peuvent pas être analysés quantitativement n'a pas de sens, j'ai donc emprunté certaines méthodes de désinfection de l'air désinfectant.Voir "GB27948-2020 Exigences générales pour les désinfectants de l'air" et "Spécifications techniques de désinfection"

1. Matériaux d'essai

1.1 Extracteur d'ADN : Dans cette expérience, deux extracteurs d'ADN disponibles dans le commerce 6 et 8 dans le tableau 1 ont été sélectionnés.

1.2 Plasmide d'essai : Considérant que la valeur CT de la plupart des pollutions de laboratoire sera supérieure à 30, la concentration du plasmide du gène ASFV utilisé cette fois est d'environ 100 copies/μL, et le CT PCR quantitatif fluorescent est d'environ 31,07.Ajouter le plasmide au coton-tige de flocage et sécher à l'air.

1.3 Instrument de test: L'instrument de désinfection Bilingkehan KVBOX, qui est aimablement soutenu par Shenzhen Runlian Environmental Technology Co., Ltd., a d'excellentes performances de désinfection de l'air avec un désinfectant au peroxyde d'hydrogène et peut tuer efficacement les spores et autres micro-organismes.

1.4 Espace d'essai : une fenêtre de transfert fermée d'environ 0,1 mètre cube.

2. Méthode d'essai

La quantité de désinfectant réglée sur la machine de désinfection est de 10 ml et la concentration est de 100 ml/m3, ce qui est beaucoup plus élevé que les "exigences générales GB27948-2020 pour les désinfectants de l'air": lors de l'utilisation de la désinfection par pulvérisation d'aérosol, la quantité de désinfectant doit être ≤ 10 ml/m3