Les tests de laboratoire commencent par la collecte d'échantillons, et la collecte d'échantillons est la plus facile à négliger.La chose la plus importante pour le prélèvement d'échantillons est de sélectionner le bon type d'échantillon, d'utiliser des outils d'échantillonnage appropriés et d'effectuer un transport et un traitement raisonnables.

I. Type d'échantillon

Les types d'échantillons courants sont les suivants :

La méthode de prélèvement peut faire référence au cahier des charges technique de surveillance environnementale du nouveau coronavirus sur le marché du commerce agricole (bazar) » :

1. Prélèvement d'échantillons de prélèvements de gorge, de mains, de vêtements et d'autres objets des praticiens : il est nécessaire d'utiliser la solution de conservation du virus dans le tube de prélèvement de virus et d'infiltrer complètement les cotons-tiges de prélèvement.La surface du sol) est appliquée à plusieurs reprises et rincée plus de 3 fois.En même temps, il est nécessaire d'effectuer un échantillonnage distribué multipoint sur la surface de l'objet échantillonné.

2. Échantillons d'écouvillonnage de la surface des aliments : les échantillons d'aliments ne peuvent pas être prélevés directement.Les aliments à collecter doivent être soigneusement séparés et stockés dans un sac d'échantillonnage propre avant de prélever des échantillons sur écouvillon.Il est nécessaire d'utiliser la solution de conservation du virus dans le tube d'échantillonnage du virus, après avoir complètement trempé le coton-tige d'échantillonnage, pour enduire et rincer à plusieurs reprises la surface de l'échantillon alimentaire à collecter plus de 3 fois.Dans le même temps, il est nécessaire d'effectuer un échantillonnage distribué multipoint sur la surface de l'échantillon.

3. Échantillons d'eaux usées : selon la distribution du système de drainage sur le marché, sélectionnez 2 à 3 emplacements d'échantillonnage des eaux usées, en vous concentrant sur la collecte du réseau de canalisations internes, l'aval du sens d'écoulement de l'eau ou la connexion avec le réseau de canalisations municipal.Pour prélever un échantillon sur écouvillon, immergez-le dans les eaux usées avec un coton-tige de prélèvement pour le faire adsorber les eaux usées et rincez-le dans le tube de prélèvement plus de 3 fois.Pour recueillir des échantillons d'eaux usées, utilisez des bouteilles en plastique polyéthylène pour recueillir des échantillons d'eaux usées de 30 à 500 ml ;pour la collecte des eaux usées d'un volume supérieur à 500 ml, des seaux en plastique polyéthylène ou un équipement spécial d'enrichissement des échantillons d'eau sur place peuvent être utilisés.Dans le même temps, il est nécessaire de procéder à un échantillonnage distribué multipoint pour le site d'échantillonnage des eaux usées.

4. Échantillons d'animaux : pour les animaux vivants, des écouvillons d'échantillonnage peuvent être utilisés pour prélever des écouvillons de surface corporelle, des écouvillons oropharyngés et des écouvillons anaux, et des échantillons d'excréments ou de sécrétions peuvent également être prélevés et consignés en conséquence sur la feuille d'enregistrement.Pour les échantillons d'animaux qui ont subi un écorchage, etc., utilisez des cotons-tiges pour prélever leurs échantillons de surface corporelle et de cavité corporelle.Il est nécessaire d'utiliser la solution de conservation du virus dans le tube d'échantillonnage du virus pour infiltrer complètement le coton-tige d'échantillonnage, puis de répéter l'application de la surface de l'échantillon alimentaire à collecter.Shabu plus de 3 fois.Dans le même temps, il est nécessaire d'effectuer un échantillonnage distribué multipoint sur la surface de l'échantillon.

5. Autres appareils : conteneurs pour le transport et l'élevage d'animaux tels que cages ou aquariums.Tout d'abord, observez ou comprenez les types spécifiques d'animaux stockés et élevés dans le conteneur, et prélevez des échantillons par écouvillonnage sur la paroi interne du conteneur ou des échantillons liquides du contenu.

6. Collectez des échantillons d'aérosols dans les zones de rassemblement, les zones commerciales locales mal ventilées, les bureaux et les salles de repos.

II.Outils d'échantillonnage
1. Tube de prélèvement sanguin
Si vous devez effectuer ultérieurement des tests d'acide nucléique et des échantillons d'anticoagulant, il est recommandé d'utiliser un vaisseau sanguin sous vide contenant de l'anticoagulant EDTA pour prélever du sang ;pour les échantillons de sérum, il est recommandé d'utiliser un vaisseau sanguin sous vide sans anticoagulant.

2. Écouvillon d'échantillonnage

Il est recommandé d'utiliser des écouvillons en polypropylène plutôt que des écouvillons en alginate de calcium ou des écouvillons avec des tiges en bois, car ils peuvent contenir des substances qui inactivent certains virus et inhibent les tests PCR.Les écouvillons avec des têtes de coton ne peuvent pas être utilisés, car les fibres de coton ont une forte adsorption de protéines et ne sont pas facilement éluées dans la solution de conservation ultérieure.

Dans les "Spécifications techniques pour la collecte et la détection mixtes 10 en 1 des nouveaux acides nucléiques du coronavirus", il est clairement stipulé que "l'écouvillon d'échantillonnage doit être en polyester, nylon et autres matériaux autres que le coton et l'alginate de calcium, et la poignée doit être en matériau autre que le bois.Le point de rupture est à environ 3 cm du haut de la tête de l'écouvillon, ce qui est facile à casser.

Le CDC aux États-Unis a également mentionné « N'utilisez que des écouvillons en fibres synthétiques avec des tiges en plastique ou en fil de fer.N'utilisez pas d'écouvillons en alginate de calcium ni d'écouvillons avec des tiges en bois,car ils peuvent contenir des substances qui inactivent certains virus et inhibent les tests PCR.

Actuellement largement utilisé est un écouvillon de flocage en nylon stérile jetable combiné avec une tige en plastique.L'écouvillon de flocage a une meilleure absorption d'eau et un meilleur taux de libération.Selon les différents sites de prélèvement, la tête d'écouvillon a également des tailles et des fibres différentes.L'épaisseur.”

3. Solution de conservation de transport d'échantillons

Solution de préservation de l'inactivation virale : une quantité appropriée de concentration de sel de guanidine et une variété de composants de lyse virale peuvent lyser directement le virus pour libérer l'acide nucléique, inactiver la RNase et la DNase et assurer l'intégrité de l'acide nucléique, qui peut être utilisé pour la détection ultérieure par qPCR.Il ne peut pas être utilisé pour la culture et l'isolement de virus.

Solution de transport et de conservation du virus : contient des sels, des acides aminés, des vitamines, du glucose et des protéines nécessaires à la survie du virus, qui peuvent maintenir l'activité du virus.Il peut être utilisé pour l'extraction d'acide nucléique et la détection du virus à l'avenir, et il peut également être utilisé pour la culture et la séparation du virus.

4. Tube de conservation d'échantillon et sac d'échantillon

Le tube de stockage de l'échantillon doit être un tube en plastique stérile avec un bouchon à vis qui n'adsorbe pas l'acide nucléique.Chaque tube d'échantillon doit être recouvert d'un sac d'échantillon pour éviter les fuites et la contamination de l'échantillon.

III.Substances interférentes dans l'échantillon

Substances interférentes dans les expériences PCR

1. interférant endogène

Les substances présentes dans l'échantillon corporel peuvent interférer avec la détection d'autres substances.

Sang:hème (>1mg/ml), hémine (>0.1ng/μl), triglycérides, IgG… ;

Urine:Urée (20 mM);

Tabouret:polysaccharides végétaux, cholate ;

Tissu:protéase, collagène;

Lait: protéase, ion calcium;

Drogues: antibiotiques, antiviraux, hormones, etc.

autre.

2. interférent exogène

Il provient de substances qui peuvent interférer avec la détection d'autres substances in vitro.Échantillons d'additifs et de substances pouvant entrer en contact lors du prélèvement et du traitement des échantillons :

Fournitures de test: gel de séparation de sérum, récipient de prélèvement d'échantillon et bouchon en caoutchouc, cathéter, liquide de rinçage de cathéter, poudre de gant, etc.

Anticoagulant: héparine (>0,1 U/mL), EDTA (>0,5 mM), etc. ;

Solvants organiques: isopropanol (>0,1 UI/ml), bétaïne, diméthylsulfoxyde, formamide, glycérine, PEG, etc. ;

Désinfectants: alcools (éthanol>1%), aldéhydes, phénols (phénol>0,2%), peroxydes, acides forts (HCL), alcalis forts (NaOH), etc. ;

Détergent:FDS (>0,005 % );

Sol: Humus

Colorant: Indigo

autre.

Dans des conditions d'échantillonnage extérieures réelles, telles que la collecte d'échantillons environnementaux, les échantillons peuvent contenir une variété de substances interférentes, et la composition des substances interférentes dans chaque emplacement est différente, ce qui nécessite des expériences d'interférence PCR à effectuer en fonction des conditions locales.

IV.Conditions de stockage et de transport des échantillons

Les échantillons cliniques fraîchement prélevés doivent être envoyés au laboratoire dans les 2 à 4 heures suivant le prélèvement entre 2°C et 8°C.Conserver à 4℃ dans les 24h.Les échantillons utilisés pour l'isolement du virus et la détection des acides nucléiques doivent être testés dès que possible.Les échantillons qui peuvent être testés dans les 24 heures peuvent être conservés à 4°C ;les échantillons qui ne peuvent pas être détectés dans les 24 heures doivent être conservés à -70°C ou moins (sinon, conserver à 70°C dans un réfrigérateur à -20°C).

Résumé:La collecte, le transport et le stockage standardisés des échantillons sont essentiels pour les tests ultérieurs.Les faux négatifs de nombreux tests de laboratoire sont causés par une collecte, un transport et un stockage inappropriés des échantillons qui entraînent la dégradation de l'acide nucléique viral.Cependant, de nombreux laboratoires ignorent encore l'importance de l'échantillonnage.J'espère que cet article pourra éveiller l'attention de chacun sur l'échantillonnage et rendre l'échantillonnage plus scientifique et raisonnable !

Produit associé :

Kit de détection d'acide nucléique variant du SARS-CoV-2 (I) (méthode de sonde fluorescente PCR multiplex) - pour la détection de mutants du Brésil, d'Afrique du Sud et du Royaume-Uni