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Kit d'extraction d'ADN par écouvillon buccal/carte FTA

L'analyse suivante des problèmes possibles dansBuccalécouvillon/ALE card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

 

La colonne de purification est bouchée

 

 

Dans ce kit, lors de l'opération d'extraction d'ADN génomique, la colonne de purification est directement adsorbée sur le mélange de lyse enzymatique de l'échantillon sans étape de centrifugation, et la colonne de purification peut être bloquée en raison d'une enzymisation incomplète et d'une viscosité élevée de l'échantillon.

Les causes possibles suivantes sont les suivantes :

1. Digestion enzymatique incomplète des échantillons de tissus.

Recommandation : Le temps de traitement de l'échantillon de Foregene Protease peut être prolongé de manière appropriée ou le surnageant peut être prélevé après centrifugation à 12 000 tr/min (~13 400× g) pendant 5 minutes.

2. Utilisation excessive d'échantillons de tissus ou de gros tissus.

Recommandation : Il est préférable de ne pas dépasser 1Buccal écouvillon dans l'échantillon ;si l'échantillon est trop volumineux, augmenter le dosage de Buffer ST1, Foregene Protease, tampon ST2 en conséquence.

3. La viscosité de l'échantillon est trop élevée.

Recommandation : Les échantillons peuvent être dilués de manière appropriée avec 10 mM de Tris-HCl avant l'extraction de l'ADN génomique.

4. Des fragments de la carte de sang ont été aspirés.

Recommandation : Le temps de centrifugation transitoire de l'étape 6 de l'extraction génomique de la tache de sang (carte FTA) peut être prolongé de manière appropriée.

 

Faible rendement ou pas d'ADN

 

Il existe souvent une variété de facteurs qui affectent le rendement de l'ADN génomique, y compris l'origine de l'échantillon, les conditions de stockage de l'échantillon, la préparation de l'échantillon, la manipulation, etc.

L'ADN génomique ne peut pas être obtenu lors de l'extraction

Les causes possibles sont les suivantes :

1. Une mauvaise conservation des échantillons ou un stockage trop long entraîne une dégradation de l'ADN génomique.

Recommandation : Les écouvillons buccaux doivent de préférence être fraîchement prélevés, et il est déconseillé d'utiliser des écouvillons conservés pour les opérations d'extraction d'ADN génomique ;les échantillons de taches de sang doivent garantir que la qualité est qualifiée et le temps de stockage ne doit pas être trop long.

2. Trop peu d'utilisation des tissus peut entraîner l'absence d'extraction de l'ADN génomique correspondant.

Recommandation : suivez lesbouccal les instructions d'échantillonnage sur écouvillon dans le guide d'utilisation et essuyez autant de fois que possible afin qu'un nombre suffisant de cellules puisse être attaché à l'écouvillon oral pour l'extraction de l'ADN génomique ;pour l'extraction d'échantillons de taches de sang, la zone de coupe des taches de sang peut être augmentée de manière appropriée.

3. La protéase Foregene est mal conservée, ce qui entraîne une diminution de son activité ou son inactivation.

Recommandation : Confirmer les conditions de stockage dele Foregene Protease ou remplacez-la par une nouvelle Foregene Protease pour une réaction enzymatique.

4. Une mauvaise conservation du kit ou une durée de stockage trop longue, entraînant la défaillance de certains composants du kit.

Recommandation : acheter un nouveauBuccal écouvillon ADNisolement kit pour les procédures associées.

5. Le tampon WB n'ajoute pas d'éthanol absolu.

Recommandation : Vérifiez que le tampon WB ajoute le volume correct d'éthanol absolu.

6. L'éluant n'est pas correctement ajouté au film de silicone.

Recommandation : Ajouter 65°Céluant préchauffé tombe au milieu de la membrane de silicone et laisser à température ambiante pendant 5 min pour augmenter l'efficacité de l'élution.

LADN génomique à faible rendement isolé

Les causes possibles suivantes sont les suivantes :

1. Une mauvaise conservation des échantillons ou un stockage trop long entraîne une dégradation de l'ADN génomique.

Recommandation : Les écouvillons oraux sont de préférence fraîchement prélevés et les écouvillons conservés ne doivent pas être utilisés pour l'extraction d'ADN génomique.

2. Si la quantité d'échantillon de tissu est trop petite, la teneur en ADN génomique extrait sera moindre.

Recommandation : Suivez les instructions d'échantillonnage sur écouvillon oral dans le guide d'utilisation, en essuyant autant de fois que possible afin que suffisamment de cellules puissent être attachées à l'écouvillon oral pour l'extraction de l'ADN génomique.

3. La protéase Foregene est mal conservée, ce qui entraîne une diminution de son activité ou son inactivation.

Recommandation : Confirmer les conditions de stockage dethe Foregene Protease ou remplacez-le par un nouveau Protéase Foregene pour réaction enzymatique.

4. Problèmes d'éluant.

Recommandation : Utiliser le tampon EB pour l'élution ;si vous utilisez ddH2O ou d'autres éluants, confirmez que le pH de l'éluat est compris entre 7,0 et 8,5.

5. L'éluat n'est pas correctement ajouté goutte à goutte.

Recommandation : Ajouter des gouttes d'éluant au milieu de la membrane en silicone et laisser à température ambiante pendant 5 min pour augmenter l'efficacité de l'élution.

6. Le liquide d'élution s'accumule trop peu.

Recommandation : Utiliser l'éluant pour l'élution de l'ADN génomique comme requis dans les instructions, au moinspas moins plus de 15μl.

Lquelle pureté of ADN génomiqueisolé

Une faible pureté de l'ADN génomique peut entraîner l'échec ou des résultats insatisfaisants des expériences en aval, telles que : les enzymes ne peuvent pas être ouvertes, la PCR ne peut pas obtenir le fragment de gène d'intérêt, etc.

Les causes possibles sont les suivantes :

1. Pollution hétéroprotéique, pollution ARN.

Analyse : La colonne de purification n'a pas été lavée avec le tampon PW ;la colonne de purification de lavage Buffer PW n'a pas été lavée à la vitesse de centrifugation correcte.

Recommandation : S'assurer qu'il n'y a pas de précipitation dans le surnageant avant d'ajouter de l'éthanol ;assurez-vous de laver la colonne de purification conformément aux instructions, et cette étape ne peut pas être omise.

2. Pollution par les ions d'impuretés.

Analyse : La colonne de purification de lavage du tampon WB a été omise ou lavée une seule fois, ce qui a entraîné une contamination ionique résiduelle.

Recommandation : assurez-vous de laver le tampon WB 2 fois comme indiqué pour éliminer autant que possible les ions résiduels.

3. Contamination par les enzymes ARN.

Analyse : des RNases étrangères ont été ajoutées au tampon ;L'opération de lavage du tampon PW était incorrecte, entraînant des résidus de RNase, affectant les opérations expérimentales d'ARN en aval, telles que la transcription in vitro.

Recommandation : Acide nucléique de la série Foregeneisolerles kits de ration peuvent éliminer l'ARN sans ajout supplémentaire de RNase,ainsi Kit d'isolement d'ADN par écouvillon buccal/carte FTAbesoin't ajouter la RNase ;assurez-vous de suivre les instructions pour la colonne de purification de lavage Buffer PW, et cette étape ne peut pas être omise.

4. Résidu d'éthanol.

Analyse : Le tampon WB n'a pas effectué de centrifugation en tube vide après le lavage de la colonne de purification.

Recommandation : Effectuez l'opération correcte de centrifugation du tube vide conformément aux instructions.

5. Autre pollution par les impuretés.

Analyse : Les échantillons sauvegardés ou les échantillons spéciaux ne sont pas prétraités.

Recommandation : prétraitez soigneusement l'échantillon comme indiqué.

 


Heure de publication : 18 mars 2022