La RNase est un mot sensible que de nombreux étudiants qui mènent souvent des expériences d'extraction d'ARN ne veulent pas entendre.Entièrement armé, l'ARN qui a finalement été extrait avec les réactifs hautement toxiques que sont le phénol et le chloroforme a été dégradé.je ne suis pas réconcilié !!!Aujourd'hui, intéressons-nous à l'origine de la fameuse Rnase.

La ribonucléase (RNase), ou RNase, est une nucléase qui peut hydrolyser l'ARN en petites molécules.La RNase, en tant que protéine à petite molécule, est exceptionnellement stable .La stérilisation conventionnelle à la vapeur à haute température et à haute pression et les inhibiteurs de protéines ne peuvent pas l'inactiver complètement.La stabilité de la RNase provient principalement des liaisons disulfure dans la structure.Par exemple, la RNase couramment utilisée du pancréas bovin n'a que 124 acides aminés, mais contient 4 liaisons disulfure.La liaison soufre et la liaison disulfure confèrent à la RNase une excellente stabilité thermique.De plus, la rnase a un poids moléculaire relativement faible et peut rapidement restaurer sa conformation d'origine dans de nombreux cas.

En plus d'être extrêmement stable,Les RNases sont omniprésentes au laboratoire .La RNase est un mécanisme de défense biologique.Pour une cellule, l'ARN exogène est souvent fatal.Comparé à l'ADN exogène, l'ARN exogène est souvent plus dangereux.L'ARN est heureusement transcrit et traduit, de sorte que presque tous les organismes ont développé des RNases pour se défendre contre l'invasion d'ARN exogène.Par conséquent, les cellules bactériennes cultivées en laboratoire et vous qui extrayez l'ARN dégagent l'arôme de la RNase.Les fluides corporels humains (salive, larmes, etc.) contiennent une grande quantité de RNase, alors ne pleurez pas lorsque l'ARN est dégradé.Plus vous pleurez, plus la dégradation de l'ARN s'aggrave !!Sister Daiyu ne convient pas à l'extraction d'ARN !

De plus, votre peau délicate contient également beaucoup de RNase, et les marqueurs, pipettes, portes de réfrigérateur et poignées de porte qui ont été touchés par la peau contiennent également de la RNase.

Avec tant de divagations, regardons comment traiter les RNases.

La première chose à laquelle tout le monde pense lors de la suppression de l'ARN estDEPC(pyrocarbonate de diéthyle).Le DEPC dénature principalement la protéine en se combinant avec le cycle imidazole du groupe actif RNase histidine, inhibant ainsi l'activité de l'enzyme.Le DEPC à 0,1 % peut avoir un meilleur effet d'élimination sur la Rnase, mais nous devons faire attention au fait que le DEPC est un cancérogène connu, donc une attention particulière doit être portée lors de son utilisation.

Pour la RNase, nous devons partir de deux aspects,le premier est d'inhiber l'activité de la RNase endogène

Les réactifs d'extraction d'ARN conventionnels tels que l'isothiocyanate de guanidine et le DTT contenus dans le Trizol peuvent ouvrir la liaison disulfure de la RNase, mais il existe encore des RNases, en particulier dans les échantillons de tissus, alors faites attention aux basses températures.

1.Immergez immédiatement l'échantillon de tissu dans de l'azote liquide après l'avoir retiré ou dans une solution de conservation d'ARN commerciale.

2.Après avoir extrait l'ARN de l'échantillon cellulaire, ajoutez-le à la solution de lyse et lysez-le sur la glacière

3. Il est préférable d'utiliser de l'azote liquide pour le broyage lorsque les échantillons de tissus sont homogénéisés.Lors de l'utilisation d'un homogénéisateur électrique sans azote liquide, veillez à pré-refroidir complètement l'adaptateur d'homogénat.

La seconde est la DNase exogène

1.Soyez complètement armé, portez une blouse de laboratoire, portez un masque et assurez-vous de porter une paire de gants neufs (ne soyez pas si économe !! Il convient de noter que le Trizol est super corrosif et qu'il est également très résistant à travers les gants, alors ne gouttez pas sur vos mains).

2.Tous les embouts de pipettes, tubes EP, tubes PCR et autres équipements utilisés doivent être traités à la dé-RNase.Il peut être trempé dans du DEPC à 0,1% puis pressurisé sous haute pression.Faites attention au fonctionnement sous une hotte aspirante.Les tyrans locaux peuvent acheter directement des consommables pour éliminer les enzymes.

PS : Laissez-moi vous dire une méthode paresseuse.Bien que la haute température et la haute pression ne puissent pas éliminer complètement la RNase, elles en élimineront une grande partie.2 fois haute température et haute pression ont un bon effet, et l'extraction de l'ARN a peu d'effet.

3.L'alcool peut dénaturer les protéines,afin que la table d'extraction d'ARN puisse être essuyée avec de l'alcool à 75% , et les gants peuvent également être aspergés d'alcool.

4.La solution de dissolution finale de l'ARN et le tube de centrifugation doivent également être traités à la dé-RNase.L'eau DEPC est une solution de dissolution d'ARN couramment utilisée.Parlons de la bonne méthode de préparation de l'eau DEPC (pensez à reconditionner le DEPC du commerce lorsque vous l'achetez)

Ajouter le DEPC à de l'eau ultrapure à 1:1000, bien agiter, laisser reposer une nuit à 37°C et stériliser à 121°C sous haute température et haute pression pendant 15 minutes.L'eau DEPC peut être conservée à -20°C en aliquotes de 1 ml.

Enfin, pour résumer : la basse température est la clé, les consommables sont bien manipulés, entièrement armés et parlent moins !

Eh bien, c'est tout pour la stratégie d'aujourd'hui.Je vous souhaite à tous la concentration et la pureté de l'ARN que vous avez mentionnées.Les deux A260/A280 sont 2.0 !!!

Bien sûr, si vous utilisez unfonctionnement à température ambiante kit d'extraction d'ARN, vous ne rencontrerez peut-être pas les problèmes ci-dessus.

Le fonctionnement à température ambiante, sans ajout de DNase, extrait l'ARN total des cellules en 11 minutes et extrait l'ARN total des tissus animaux ou végétaux en 30 minutes.

Pour des échantillons d'essai, veuillez contacter :overseas@foregene.com

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