Écouvillon buccal/carte FTA Kit d'isolement d'ADN Kit d'extraction ou de purification d'ADN génomique à partir d'écouvillons buccaux
Description du kit :
Purifiez rapidement l'ADN génomique de haute qualité à partir d'échantillons d'écouvillons buccaux/de cartes FTA.
◮Pas de contamination RNase :La colonne DNA-Only fournie par le kit permet de retirer l'ARN de l'ADN génomique sans ajouter de RNase au cours de l'expérience, évitant ainsi au laboratoire d'être contaminé par de la RNase exogène.
◮Vitesse rapide:La protéase Foregene a une activité plus élevée que les protéases similaires et digère rapidement les échantillons de tissus ;l'opération est simple et l'opération d'extraction de l'ADN génomique peut être effectuée en 20 à 80 minutes.
◮Pratique:La centrifugation est effectuée à température ambiante, et il n'y a pas besoin de centrifugation à basse température à 4°C ou de précipitation à l'éthanol de l'ADN.
◮Sécurité:Aucune extraction de réactif organique n'est nécessaire.
◮Haute qualité:L'ADN génomique extrait a de gros fragments, pas d'ARN, pas de RNase et une teneur en ions extrêmement faible, ce qui peut répondre aux exigences de diverses expériences.
◮Système de micro-élution :Il peut augmenter la concentration d'ADN génomique, ce qui est pratique pour la détection ou l'expérimentation en aval.
Description
Ce kit fournit une méthode efficace et rapide pour obtenir de l'ADN génomique à haute concentration à partir d'écouvillons buccaux et de cartes FTA (taches de sang).Utilisation de notre société'Grâce à la formule et à la colonne de centrifugation à membrane de silice à ADN uniquement, associées à la protéase Foregene, l'ADN génomique à haute concentration et de haute qualité peut être extrait en 80 minutes.La petite colonne de purification spécialement conçue lie l'ADN génomique, et l'ADN peut être élué avec une petite quantité (15 μl) système d'élution pour augmenter la concentration de l'ADN génomique obtenu, ce qui est pratique pour la détection ou l'expérience en aval.Le kit peut traiter un ou plusieurs échantillons à la fois, et le processus de purification ne nécessite pas d'extraction de substances organiques telles que le phénol, le chloroforme et la précipitation chronophage d'isopropanol ou d'éthanol, et l'opération est simple et rapide.
Caractéristiques
50 préparations
Composants du kit
| Tampon ST1 |
| Tampon ST2 |
| Acrylamide linéaire |
| Tampon PW |
| Tampon WB |
| Tampon EB |
| Foregene Protéase |
| Colonne ADN uniquement |
| Instructions |
Fonctionnalités et avantages
-Pas de contamination par la RNase : La colonne DNA-Only fournie par le kit permet de retirer l'ARN de l'ADN génomique sans ajouter de RNase pendant l'expérience, évitant ainsi au laboratoire d'être contaminé par de la RNase exogène.
-Vitesse rapide : la protéase Foregene a une activité plus élevée que les protéases similaires, digère rapidement les échantillons ;opération simple.
-Pratique : la centrifugation est effectuée à température ambiante, et il n'est pas nécessaire d'effectuer une centrifugation à basse température à 4 °C ou une précipitation à l'éthanol de l'ADN.
-Sécurité : Aucune extraction de réactif organique n'est nécessaire.
-Haute qualité: L'ADN génomique extrait contient de gros fragments, pas d'ARN, pas de RNase et une teneur en ions extrêmement faible, ce qui peut répondre aux exigences de diverses expériences.
-Système de micro-élution : il peut augmenter la concentration d'ADN génomique, ce qui est pratique pour la détection ou l'expérimentation en aval.
Demande de kit
Il convient à la purification de l'ADN génomique des échantillons suivants : écouvillons buccaux, carte FTA (taches de sang).
Stockage et durée de conservation
-Ce kit se conserve 12 mois au sec à température ambiante (15-25°C) ;s'il doit être conservé plus longtemps, il peut être conservé à 2-8°C.
Remarque : si elle est conservée à basse température, la solution est sujette à la précipitation.Avant utilisation, veillez à placer la solution dans le kit à température ambiante pendant un certain temps.Si nécessaire, préchauffez-le dans un bain-marie à 37°C pendant 10 minutes pour dissoudre le précipité, et mélangez-le avant utilisation.
-La solution Foregene Protease a une formule unique, qui est active lorsqu'elle est conservée à température ambiante pendant une longue période (3 mois);son activité et sa stabilité seront meilleures lorsqu'il est conservé à 4°C, il est donc recommandé de le conserver à 4°C, rappelez-vous de ne pas le conserver à -20°C.
La colonne de purification est bouchée
Dans ce kit, lors de l'opération d'extraction d'ADN génomique, la colonne de purification est directement adsorbée sur le mélange de lyse enzymatique de l'échantillon sans étape de centrifugation, et la colonne de purification peut être bloquée en raison d'une enzymisation incomplète et d'une viscosité élevée de l'échantillon.
Les causes possibles suivantes sont les suivantes :
1. Digestion enzymatique incomplète des échantillons de tissus.
Recommandation : Le temps de traitement de l'échantillon de Foregene Protease peut être prolongé de manière appropriée ou le surnageant peut être prélevé après centrifugation à 12 000 tr/min (~ 13 400 × g) pendant 5 min.
2. Utilisation excessive d'échantillons de tissus ou de gros tissus.
Recommandation : Il est préférable de ne pas dépasser 1 écouvillon buccal dans l'échantillon ;si l'échantillon est trop volumineux, augmenter le dosage de Buffer ST1, Foregene Protease, tampon ST2 en conséquence.
3. La viscosité de l'échantillon est trop élevée.
Recommandation : Les échantillons peuvent être dilués de manière appropriée avec 10 mM de Tris-HCl avant l'extraction de l'ADN génomique.
4. Des fragments de la carte de sang ont été aspirés.
Recommandation : Le temps de centrifugation transitoire de l'étape 6 de l'extraction génomique de la tache de sang (carte FTA) peut être prolongé de manière appropriée.
Faible rendement ou pas d'ADN
Il existe souvent une variété de facteurs qui affectent le rendement de l'ADN génomique, y compris l'origine de l'échantillon, les conditions de stockage de l'échantillon, la préparation de l'échantillon, la manipulation, etc.
L'ADN génomique ne peut pas être obtenu lors de l'extraction
Les causes possibles sont les suivantes :
1. Une mauvaise conservation des échantillons ou un stockage trop long entraîne une dégradation de l'ADN génomique.
Recommandation : Les écouvillons buccaux doivent de préférence être fraîchement prélevés, et il est déconseillé d'utiliser des écouvillons conservés pour les opérations d'extraction d'ADN génomique ;les échantillons de taches de sang doivent garantir que la qualité est qualifiée et le temps de stockage ne doit pas être trop long.
2. Trop peu d'utilisation des tissus peut entraîner l'absence d'extraction de l'ADN génomique correspondant.
Recommandation : suivez les instructions d'échantillonnage de l'écouvillon buccal dans le guide d'utilisation et essuyez autant de fois que possible afin que suffisamment de cellules puissent être attachées à l'écouvillon oral pour l'extraction de l'ADN génomique ;pour l'extraction d'échantillons de taches de sang, la zone de coupe des taches de sang peut être augmentée de manière appropriée.
3. La protéase Foregene est mal conservée, ce qui entraîne une diminution de son activité ou son inactivation.
Recommandation : Confirmer les conditions de stockage de la Foregene Protease ou la remplacer par une nouvelle Foregene Protease pour réaction enzymatique.
4. Une mauvaise conservation du kit ou une durée de stockage trop longue, entraînant la défaillance de certains composants du kit.
Recommandation : acheter un nouveau kit d'isolement d'ADN par écouvillonnage buccal pour les procédures associées.
5. Le tampon WB n'ajoute pas d'éthanol absolu.
Recommandation : Vérifiez que le tampon WB ajoute le volume correct d'éthanol absolu.
6. L'éluant n'est pas correctement ajouté au film de silicone.
Recommandation : Ajouter des gouttes d'éluant préchauffées à 65 °C au milieu de la membrane en silicone et laisser à température ambiante pendant 5 min pour augmenter l'efficacité de l'élution.
ADN génomique à faible rendement isolé
Les causes possibles suivantes sont les suivantes :
1. Une mauvaise conservation des échantillons ou un stockage trop long entraîne une dégradation de l'ADN génomique.
Recommandation : Les écouvillons oraux sont de préférence fraîchement prélevés et les écouvillons conservés ne doivent pas être utilisés pour l'extraction d'ADN génomique.
2. Si la quantité d'échantillon de tissu est trop petite, la teneur en ADN génomique extrait sera moindre.
Recommandation : Suivez les instructions d'échantillonnage sur écouvillon oral dans le guide d'utilisation, en essuyant autant de fois que possible afin que suffisamment de cellules puissent être attachées à l'écouvillon oral pour l'extraction de l'ADN génomique.
3. La protéase Foregene est mal conservée, ce qui entraîne une diminution de son activité ou son inactivation.
Recommandation : Confirmer les conditions de stockage de la Foregene Protease ou la remplacer par une nouvelle Foregene Protease pour réaction enzymatique.
4. Problèmes d'éluant.
Recommandation : Utiliser le tampon EB pour l'élution ;si vous utilisez ddH2O ou d'autres éluants, confirmez que le pH de l'éluat est compris entre 7,0 et 8,5.
5. L'éluat n'est pas correctement ajouté goutte à goutte.
Recommandation : Ajouter des gouttes d'éluant au milieu de la membrane en silicone et laisser à température ambiante pendant 5 min pour augmenter l'efficacité de l'élution.
6. Le liquide d'élution s'accumule trop peu.
Recommandation : Utiliser l'éluant pour l'élution de l'ADN génomique comme requis dans les instructions, au moins pas moins de 15 μl.
Faible pureté de l'ADN génomique isolé
Une faible pureté de l'ADN génomique peut entraîner l'échec ou des résultats insatisfaisants des expériences en aval, telles que : les enzymes ne peuvent pas être ouvertes, la PCR ne peut pas obtenir le fragment de gène d'intérêt, etc.
Les causes possibles sont les suivantes :
1. Pollution hétéroprotéique, pollution ARN.
Analyse : La colonne de purification n'a pas été lavée avec le tampon PW ;la colonne de purification de lavage Buffer PW n'a pas été lavée à la vitesse de centrifugation correcte.
Recommandation : S'assurer qu'il n'y a pas de précipitation dans le surnageant avant d'ajouter de l'éthanol ;assurez-vous de laver la colonne de purification conformément aux instructions, et cette étape ne peut pas être omise.
2. Pollution par les ions d'impuretés.
Analyse : La colonne de purification de lavage du tampon WB a été omise ou lavée une seule fois, ce qui a entraîné une contamination ionique résiduelle.
Recommandation : assurez-vous de laver le tampon WB 2 fois comme indiqué pour éliminer autant que possible les ions résiduels.
3. Contamination par les enzymes ARN.
Analyse : des RNases étrangères ont été ajoutées au tampon ;L'opération de lavage du tampon PW était incorrecte, entraînant des résidus de RNase, affectant les opérations expérimentales d'ARN en aval, telles que la transcription in vitro.
Recommandation : les kits d'isolement d'acide nucléique de la série Foregene peuvent éliminer l'ARN sans ajout supplémentaire de RNase, ainsi le kit d'isolement d'ADN sur écouvillon buccal/carte FTA n'a pas besoin d'ajouter de RNase ;assurez-vous de suivre les instructions pour la colonne de purification de lavage Buffer PW, et cette étape ne peut pas être omise.
4. Résidu d'éthanol.
Analyse : Le tampon WB n'a pas effectué de centrifugation en tube vide après le lavage de la colonne de purification.
Recommandation : Effectuez l'opération correcte de centrifugation du tube vide conformément aux instructions.
5. Autre pollution par les impuretés.
Analyse : Les échantillons sauvegardés ou les échantillons spéciaux ne sont pas prétraités.
Recommandation : prétraitez soigneusement l'échantillon comme indiqué.
